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服务介绍:
亚硫酸氢盐处理后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是检测基因甲基化的经典方法,其原理为:用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U),而甲基化的胞嘧啶则不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶。最后,将PCR产物克隆至载体后进行测序,测序结果与未经处理的序列比较,分析CpG位点是否发生甲基化,这种方法称为BSP-克隆测序法。此方法精确度高,能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态。一般选取10个克隆子的测序结果进行数据分析。
实验流程:取材- DNA提取-亚硫酸氢盐处理-纯化DNA-PCR扩增-TA克隆-测序-发报告
送样运输要求:
1.动物组织:新鲜的组织量100 mg(黄豆大小),最少50 mg(绿豆大小),脂肪组织、结缔组织、纤维化组织适当增加。干冰运输。
2.植物组织:新鲜的叶、果肉、种子等最少需100 mg。干冰运输。
3.细胞:1×10^6个细胞,收集细胞沉淀,干冰运输。
4.全血:最少1 mL新鲜血液EDTA抗凝管,-20度运输。
5.DNA:体积≥50 uL,浓度≥ 50 ng/uL,干冰运输。
注:植物样本的甲基化实验需要客户提供具体的启动子序列信息。
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