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泛素化蛋白质组学
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泛素化蛋白质组学
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服务介绍:

蛋白质组学(Proteomics)指的是大规模、高通量地研究一个细胞、组织或物种中表达的全套蛋白质的学科。近十年来,质谱技术的飞速发展大大推动了的蛋白质组学的进步,基于质谱的蛋白质组学已经成为蛋白质研究领域必不可少的技术手段。通过蛋白质组学技术可以对生物样本中的蛋白质、翻译后修饰位点(如磷酸化)进行大规模地鉴定或定量,进而从高通量的数据分析中挖掘有价值的信息和规律,为功能机制的探究提供线索和基础。2003年,人类基因组计划(HGP)完成精细图的绘制后,同年,人类蛋白质组学计划(HPP)随即开展起来,反映了科研领域对蛋白质组学的重视。经过十年时间,多家单位的共同努力下,人类蛋白质组草图也于2014年在Nature杂志公布了。


泛素是一类在真核细胞中普遍存在的由76个氨基酸组成的高度保守小分子。泛素-蛋白酶体系统是细胞内绝大多数蛋白质降解的主要方式之一泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system, UPS)介导了真核生物80%~85%的蛋白质降解,该蛋白质降解途径具有依赖ATP、高效、高度选择性的特点。除参与蛋白质降解之外,泛素化修饰还可以直接影响蛋白质的活性和定位。由于泛素化修饰底物蛋白在细胞中的广泛存在,泛素化修饰可以调控包括细胞周期、细胞凋亡、转录调控、DNA损伤修复以及免疫应答等在内的多种细胞活动。 利用对泛素化赖氨酸(K-GG)具有高亲和力的基序抗体,特异性富集复杂样本中的泛素化肽段,结合LC-MS/MS蛋白质定量方法,实现大规模泛素化蛋白质定性定量分析。


实验流程:

蛋白提取—蛋白酶解—泛素化肽段富集—高分辨质谱检测采集数据—数据库检索—数据分析-差异蛋白筛选-生物信息分析


送样运输要求:

1、蛋白样本

①蛋白量大于100ug,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

②建议测定蛋白浓度后,液氮速冻,避免蛋白降解,另外需要告知蛋白溶液的缓冲液成分和浓度,方便实验室收到后进行后续处理。

③胶条、胶点样本不建议进行定量蛋白质组学。


2、细胞样本

①细胞量1x107个,收集细胞沉淀,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

②收集时,用预冷PBS缓冲液清洗三次,去除培养基成分,然后离心去除上清保存。


3、血清样本

①样本量500uL,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

②样本应尽量避免溶血。


4、血浆样本

①样本量500uL,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

②样本应尽量避免溶血。


5、尿液样本

①样本量2mL,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

②样品应尽量避免带入粪便残渣。


6、动物组织样本

①样本量300mg,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

②收集时,用预冷PBS缓冲液冲洗表面血液,并用滤纸吸干多余水分,避免冻存时结冰。

③固定液浸泡过的样本无法进行检测。


7、植物组织样本

①样本量500mg,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

②收集时,用预冷PBS缓冲液冲洗表面泥沙,并用滤纸吸干多余水分,避免冻存时结冰。

③固定液浸泡过的样本无法进行检测。


8、微生物样本

①样本量干重200mg,-80℃保存,纯干冰运输,避免反复冻融。

②收集时,用预冷PBS缓冲液清洗三次,去除培养基成分,然后离心去除上清保存。

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