服务介绍：

抗原抗体的结合非常特异。免疫荧光双标是用两种不同种属来源的抗体共同孵育同一张组织切片，两种抗体分别与两种目标蛋白特异性结合，然后再用带有不同颜色的荧光染料标记的第二抗体分别与其对应的第一抗体结合，在组织切片扫描仪或者荧光显微镜下用对应波长的光去激发染料发出两种不同的荧光，进而将两种不同目标蛋白通过间接标记的方式用两种荧光显示出来。也可以利用TSA技术进行荧光标记，有信号放大的作用同时可以不限制一抗的种属，同源或异源一抗都可以标记。TSA技术主要原理为用HRP标记的第二抗体与第一抗体结合后，再孵育荧光标记的酪胺（TSA），TSA在二抗上偶联的HRP与H₂O₂的作用下变为活化的酪胺并附着在目标蛋白周围的蛋白酪氨酸残基上，此结合是共价结合。而一抗与靶标、二抗与一抗之间是非共价结合。通过高温和微波处理，非共价结合的一抗二抗被打断并洗脱掉，而共价结合的荧光酪胺依然附着在靶标周围，进而将靶标通过荧光标记显示出来。每轮标记都按一抗-二抗-TSA的顺序对相应抗原进行标记，每轮染色只需改变TSA荧光染料种类即可实现多个靶标用不同荧光染料进行共同标记。在组织切片扫描仪或者荧光显微镜下用荧光染料对应波长的光去激发染料发出荧光进而将目标蛋白通过间接标记的方式显示出来。

切片数字扫描是通过控制显微成像系统和切片以一定的规则运动，采集多张连续的高分辨率显微图像再无缝拼接生成一张高分辨率的组织切片全景图像。该图像包含了玻片上所有的信息，可在电脑上用浏览软件任意放大和缩小，任意部位观察采图，是真正脱离显微镜的阅片方式。通过在扫描仪上加载与免疫标记时荧光染料匹配的最佳激发波长和发射波长的滤光块，获取不同荧光通道的图像。可单通道，多通道任意组合浏览并按需采图。

送样运输要求：

1、组织样本放置于10倍样本体积的通用型组织固定液中固定24h以上，常温保存运输石蜡包埋切片或者冰冻切片。置于固定液内的组织切勿冷冻结冰，切勿固定时间过长。细胞爬片用通用型组织固定液固定，封口膜封好防止漏液，常温保存运输。

2、石蜡切片常温保存运输。冰冻切片-20°保存运输。

实验流程：

荧光二抗法：石蜡切片脱蜡至水（冰冻切片和细胞爬片无需此步）——微波抗原修复——画圈血清封闭——同时孵育两种异源一抗——同时孵育对应种属的两种荧光二抗——DAPI染核——自发荧光淬灭——抗荧光淬灭封片剂封片——扫描全景成像。

TSA法：石蜡切片脱蜡至水（冰冻切片和细胞爬片无需此步）——微波抗原修复——画圈双氧水封闭——血清封闭——孵育第一种一抗——孵育HRP二抗——孵育iF555-TSA——微波处理——血清封闭——孵育第二种一抗——孵育HRP二抗——孵育iF488-TSA ——DAPI染核——自发荧光淬灭——抗荧光淬灭封片剂封片——扫描全景成像。