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项目介绍:
免疫电镜是利用抗原抗体特异性结合原理,在一张超薄切片(镍网)上,用特异性一抗与待检测抗原结合,然后用带有胶体金标记的二抗与一抗抗原复合物结合。在电子显微镜下胶体金为黑色颗粒状物质,在组织和细胞超微结构上清楚定位抗原,实现蛋白于亚细胞水平的定位,如线粒体、内质网等。
样本准备:
将可孵育抗体的超薄切片,捞于镍网,干燥后送样。
实验步骤:
免疫标记:
①复温水合:镍网从4℃取出用超纯水悬浮5min;
②清洗:TBS室温清洗3次,每次5min;
③封闭:1%BSA/TBS的封闭液室温封闭30min;
④加一抗:抗体与封闭液按一定稀释比稀释后4℃过夜孵育;
⑤清洗:室温复温后,TBS清洗3次,每次5min;
⑥加二抗:二抗与二抗稀释液按一定稀释比稀释,先室温孵育20min,后转37℃烘箱孵育1h,然后转室温复温0.5h。实验过程中防止干片。
⑦清洗:TBS清洗5次,每次5min后,超纯水清洗5次,每次5min。
⑧铀复染:镍网于2%醋酸铀饱和酒精溶液避光染色8min;70%酒精清洗3次;超纯水清洗3次。
⑨烘干:清洗后的镍网用滤纸吸干后放入网板中,37℃烘箱放置10min烘干备用。
备注:
1、如果公司无抗体,需要客户自己提供抗体。市面上抗体大多未进行免疫电镜标记验证,标记效果不确定。未标记成功收取一半费用。
2、如果客户使用本公司一抗,需额外收取一抗抗体使用费130元/张。
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