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项目介绍：
免疫电镜双标是利用抗原抗体特异性结合原理，在一张超薄切片（镍网）上，用两种不同来源的特异性一抗分别与两种待检测抗原结合，然后用带有两种不同粒径胶体金标记的二抗分别与对应种属的一抗抗原复合物结合。在电子显微镜下胶体金为黑色颗粒状物质，根据胶体金颗粒大小在组织和细胞超微结构上分别定位两种抗原，实现两种蛋白于亚细胞水平（如线粒体、内质网等）的定位及空间位置关系分析。免疫电镜双抗标记，需要选用不同来源的一抗。我司现有4nm和12nm山羊抗小鼠、山羊抗大鼠、山羊抗兔胶体金二抗。如提供其他来源的一抗，需要自行提供对应的胶体金二抗进行试验。
样本准备：
将可孵育抗体的超薄切片，捞于镍网，干燥后防尘送样。
实验步骤：
免疫标记：
①复温水合：镍网从4℃取出用超纯水悬浮5min；
②清洗：TBS室温清洗3次，每次5min；
③封闭：1%BSA/TBS的封闭液室温封闭30min；
④加一抗：将混合抗体与封闭液按一定稀释比稀释后4℃过夜孵育；
⑤清洗：室温复温后，TBS清洗3次，每次5min；
⑥加二抗：将混合二抗与二抗稀释液按一定稀释比稀释，先室温孵育20min，后转37℃烘箱孵育1h，然后转室温复温0.5h。实验过程中防止干片。
⑦清洗：TBS清洗5次，每次5min后，超纯水清洗5次，每次5min。
⑧铀复染：镍网于2%醋酸铀饱和酒精溶液避光染色8min；70%酒精清洗3次；超纯水清洗3次。
⑨烘干：清洗后的镍网用滤纸吸干后放入网板中，37℃烘箱放置10min烘干备用。
备注：
1、如果公司无抗体，需要客户自己提供抗体。市面上抗体大多未进行免疫电镜标记验证，标记效果不确定。未标记成功收取一半费用。
2、如果客户使用本公司一抗，需额外收取一抗抗体使用费130元/张。
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