服务介绍：

抗原抗体的结合非常特异。免疫荧光双标是用两种不同种属来源的抗体共同孵育同一张组织切片，两种抗体分别与两种目标蛋白特异性结合，然后再用带有不同颜色的荧光染料标记的第二抗体分别与其对应的第一抗体结合，在组织切片扫描仪或者荧光显微镜下用对应波长的光去激发染料发出两种不同的荧光，进而将两种不同目标蛋白通过间接标记的方式用两种荧光显示出来。也可以利用TSA技术进行荧光标记，有信号放大的作用同时可以不限制一抗的种属，同源或异源一抗都可以标记。TSA技术主要原理为用HRP标记的第二抗体与第一抗体结合后，再孵育荧光标记的酪胺（TSA），TSA在二抗上偶联的HRP与H₂O₂的作用下变为活化的酪胺并附着在目标蛋白周围的蛋白酪氨酸残基上，此结合是共价结合。而一抗与靶标、二抗与一抗之间是非共价结合。通过高温和微波处理，非共价结合的一抗二抗被打断并洗脱掉，而共价结合的荧光酪胺依然附着在靶标周围，进而将靶标通过荧光标记显示出来。每轮标记都按一抗-二抗-TSA的顺序对相应抗原进行标记，每轮染色只需改变TSA荧光染料种类即可实现多个靶标用不同荧光染料进行共同标记。在组织切片扫描仪或者荧光显微镜下用荧光染料对应波长的光去激发染料发出荧光进而将目标蛋白通过间接标记的方式显示出来。

组织芯片（细胞芯片）是将许多不同个体组织或细胞标本以规则阵列方式排布于同一载玻片上，进行同一指标的原位组织学研究。客户提供供体组织，细胞或蜡块，在芯片制作过程中首先将供体组织，细胞包埋成单个供体蜡块，按照客户要求用取样针从供体蜡块上将目的区域的组织取出并按照客户要求将不同的组织点排列在事先制作好的受体蜡块上。然后将排列好的组织点与受体蜡块进行融合成一个蜡块再进行后续的切片。切出来的片子同一载玻片上包含了客户需要同时观察和对比的所有组织，这样的切片用于后续进行染色或免疫组化/荧光操作即可将载玻片上所有的组织点条件控制一致，这样比一个组织一张切片操作起来更方便快捷，组织间对比更明显结果更可靠。

切片数字扫描是通过控制显微成像系统和切片以一定的规则运动，采集多张连续的高分辨率显微图像再无缝拼接生成一张高分辨率的组织切片全景图像。该图像包含了玻片上所有的信息，可在电脑上用浏览软件任意放大和缩小，任意部位观察采图，是真正脱离显微镜的阅片方式。通过在扫描仪上加载与免疫标记时荧光染料匹配的最佳激发波长和发射波长的滤光块，获取不同荧光通道的图像。可单通道，多通道任意组合浏览并按需采图。切片扫描尤其适用于芯片的浏览观察和结果比较。

扫描的荧光图像可以用软件对阳性信号进行半定量分析，用数据去评价阳性的强弱。对于阳性为单个细胞表达的指标可以做阳性细胞相关参数的分析，对于阳性为成片表达的指标可以做阳性面积相关参数的分析。阳性细胞数量相关参数包含：各指标阳性细胞比率、阳性细胞密度、阳性强度。一次分析即可获取各指标阳性细胞数量相关参数的三个数值。阳性细胞数量相关参数均可用于评价阳性强弱多少，可根据需求进行选择应用。阳性面积相关参数包含：阳性面积比，阳性强度。一次分析即可获取各指标阳性面积相关参数的两个数值。阳性面积相关参数均可用于评价阳性强弱多少，可根据需求进行选择应用。

送样运输要求：

1、组织样本放置于10倍样本体积的通用型组织固定液中固定24h以上，常温保存运输石蜡包埋。置于固定液内的组织切勿冷冻结冰，切勿固定时间过长。

2、石蜡切片常温保存运输。

实验流程：

荧光二抗法：石蜡切片脱蜡至水——微波抗原修复——画圈血清封闭——同时孵育两种异源一抗——同时孵育对应种属的两种荧光二抗——DAPI染核——自发荧光淬灭——抗荧光淬灭封片剂封片——扫描全景成像——数据分析。

TSA法：石蜡切片脱蜡至水——微波抗原修复——画圈双氧水封闭——血清封闭——孵育第一种一抗——孵育HRP二抗——孵育iF555-TSA——微波处理——血清封闭——孵育第二种一抗——孵育HRP二抗——孵育iF488-TSA ——DAPI染核——自发荧光淬灭——抗荧光淬灭封片剂封片——扫描全景成像——数据分析。