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免疫荧光四标五色(切片)
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免疫荧光四标五色(切片)
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SDS-10180
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商品介绍

服务介绍:

免疫荧光四标即利用酪胺信号放大(TSA,Tyramide signal amplification)即TSA技术,在同一张切片上对四种蛋白同时进行标记,从而可实现对多种蛋白空间定位,定性及半定量分析。


TSA技术主要原理为荧光标记的酪胺在二抗上偶联的HRP与H2O2的作用下变为活化的酪胺并附着在靶标周围的蛋白酪氨酸残基上,此结合是共价结合。而一抗与靶标、二抗与一抗之间是非共价结合。通过微波处理,非共价结合的一抗二抗被打断并洗脱掉,而共价结合的荧光酪胺依然附着在靶标周围,将靶标通过荧光标记显示出来。在检测第二个靶标时,相当于全新的一轮标记,无需考虑第二轮的抗体是否与第一轮的抗体产生交叉反应。只需改变不同种类荧光染料标记TSA即可实现多个靶标的标记。通过多次重复免疫标记,使用不同的荧光酪胺实现双重或多重荧光染色。


送样运输要求:

1、组织样本放置于10倍样本体积的通用型组织固定液中固定24h以上,常温保存运输石蜡包埋切片。切勿冷冻结冰,切勿固定时间过长。

2、石蜡切片常温保存运输。

3、荧光四标只能做石蜡包埋切片,不能做冰冻切片和细胞爬片。

4、TSA 荧光染料光谱数据及我司扫描仪推荐搭配方式


实验大体流程:

石蜡切片脱蜡至水——微波抗原修复——画圈双氧水封闭——血清封闭——孵育第一种一抗——孵育HRP二抗——孵育iF555-TSA——微波处理——血清封闭——孵育第二种一抗——孵育HRP二抗——孵育iF488-TSA——微波处理——血清封闭——孵育第三种一抗——孵育HRP二抗——孵育iF647-TSA——微波处理——血清封闭——孵育第四种一抗——孵育iF594荧光二抗——DAPI染核——自发荧光淬灭——抗荧光淬灭封片剂封片——扫描全景成像。


各种荧光素颜色及激发与发射波长见下表,可进行对应波长的光谱或荧光滤片成像。推荐在我司进行切片全景扫描。

荧光通道类型:

TSA试剂盒

荧光染料类型

激发波长/nm

发射波长/nm

荧光双标

荧光三标

荧光四标

荧光五标

荧光六标

DAPI

359

457

iF440-Tyramide

434

480

 

 

iF488-Tyramide

491

516

iF546-Tyramide

541

557

 

 

iF555-Tyramide

557

570

 

 

 

iF594-Tyramide

588

604

 

 

 

iF647-Tyramide

656

670

 

 

iF700-Tyramide

690

713

 

 

 

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