免疫荧光五标六色（切片）_合肥赛德斯生物科技有限公司

免疫荧光五标六色（切片）

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货号：

SDS-10181

规格：

张

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商品介绍

服务介绍：

免疫荧光五标即利用酪胺信号放大（TSA，Tyramide signal amplification）即TSA技术，在同一张切片上对五种蛋白同时进行标记，从而可实现对多种蛋白空间定位，定性及半定量分析。

TSA技术主要原理为荧光标记的酪胺在二抗上偶联的HRP与H₂O₂的作用下变为活化的酪胺并附着在靶标周围的蛋白酪氨酸残基上，此结合是共价结合。而一抗与靶标、二抗与一抗之间是非共价结合。通过微波处理，非共价结合的一抗二抗被打断并洗脱掉，而共价结合的荧光酪胺依然附着在靶标周围，将靶标通过荧光标记显示出来。在检测第二个靶标时，相当于全新的一轮标记，无需考虑第二轮的抗体是否与第一轮的抗体产生交叉反应。只需改变不同种类荧光染料标记TSA即可实现多个靶标的标记。通过多次重复免疫标记，使用不同的荧光酪胺实现双重或多重荧光染色

送样运输要求：

1、组织样本放置于10倍样本体积的通用型组织固定液中固定24h以上，常温保存运输石蜡包埋切片。切勿冷冻结冰，切勿固定时间过长。

2、石蜡切片常温保存运输。

3、荧光五标只能做石蜡包埋切片，不能做冰冻切片和细胞爬片。

4、TSA 荧光染料光谱数据及我司扫描仪推荐搭配方式

实验大体流程：

石蜡切片脱蜡至水——微波抗原修复——画圈双氧水封闭——血清封闭——孵育第一种一抗——孵育HRP二抗——孵育iF440-TSA——微波处理——血清封闭——孵育第二种一抗——孵育HRP二抗——孵育iF488-TSA——微波处理——血清封闭——孵育第三种一抗——孵育HRP二抗——孵育iF546-TSA——微波处理——血清封闭——孵育第四种一抗——孵育HRP二抗——孵育iF594-TSA——微波处理——血清封闭——孵育第五种一抗——孵育HRP二抗——孵育iF700-TSA——DAPI染核——自发荧光淬灭——抗荧光淬灭封片剂封片——扫描全景成像。

各种荧光素颜色及激发与发射波长见下表，可进行对应波长的光谱或荧光滤片成像。推荐在我司进行切片全景扫描。

荧光通道类型：

TSA试剂盒荧光染料类型	激发波长/nm	发射波长/nm	荧光双标	荧光三标	荧光四标	荧光五标	荧光六标
DAPI	359	457	√	√	√	√	√
iF440-Tyramide	434	480			√	√	√
iF488-Tyramide	491	516	√	√	√	√	√
iF546-Tyramide	541	557			√	√	√
iF555-Tyramide	557	570	√	√
iF594-Tyramide	588	604				√	√
iF647-Tyramide	656	670		√	√		√
iF700-Tyramide	690	713				√	√